Citometria de fluxo
O Centro de Recursos Compartilhados de Citometria de Fluxo oferece acesso centralizado a tecnologias avançadas de citometria e suporte técnico especializado para membros do UNMCCC, laboratórios da UNM e a comunidade científica em geral. O Centro oferece análises de citometria de fluxo de última geração e triagem celular de alta velocidade por meio de um conjunto de modelos de serviço escaláveis, incluindo aquisição completa, fluxos de trabalho assistidos e uso independente — todos adaptados para atender às diversas necessidades e níveis de experiência dos usuários.
Os serviços oferecem suporte a uma ampla gama de aplicações, incluindo imunofenotipagem clássica, análise do ciclo celular e apoptose, estudos de microambiente tumoral e infiltração de leucócitos, além de triagem de células individuais para geração de linhagens monoclonais, construção de bibliotecas CRISPR ou integração em fluxos de trabalho de triagem para sequenciamento (por exemplo, 10x Genomics scRNA-seq). A triagem em massa também está disponível para recultura, transplante ou análises ômicas posteriores.
Uma equipe de especialistas fornece consultoria em design de painel, desenvolvimento de protocolo, configuração de instrumentos e interpretação de dados para garantir resultados reprodutíveis e de alta qualidade.
W. Curt HinesDoutorado
Diretor do corpo docente, Recurso compartilhado de citometria de fluxo
Professor Associado, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular
Sala Fitz Hall 255
915 Camino De Salud NE
Albuquerque, NM 87131
Telefone: +505 681-0014
Josh Monts, MS
Diretor Técnico, Recurso Compartilhado de Citometria de Fluxo
2325 Caminho da Saúde, CRF 217
Centro Integrado do Câncer da UNM
Centro de Ciências da Saúde da Universidade do Novo México
Albuquerque, NM 87131
Telefone: +505 925-0064
Recurso compartilhado: Citometria de fluxo
Análise citométrica de fluxo de última geração e triagem celular de alta velocidade por meio de um repertório de modelos de serviço escaláveis.
Instrumentação de Citometria: Analisadores
Saiba mais sobre o Sintonizar NxT- lasers 405 (6), 488 (2), 561 (3), 640 (3) milhas náuticas
- 14 detectores de cores
- Construtor de Painel
Taxa UNM sem assistência: $ 94 / hora
Taxa não UNM: $ 141.94 / hr
Saiba mais sobre o BD Accuri C6- lasers 488 (3), 640 (1) milhas náuticas
- 4 detectores de cores
- Construtor de Painel
Taxa UNM sem assistência: $ 73 / hora
Taxa não UNM: $ 110.23 / hr
Saiba mais sobre o Cytek Aurora- Lasers 405nm, 488nm, 561nm 641nm
- Três canais de dispersão
- 48 canais de fluorescência
- Construtor de Painel
Taxa UNM sem assistência: $ 113 / hora
Taxa não UNM: $ 170.63 / hr
Saiba mais sobre o CytoFLEX S- lasers 405 (2), 488 (2), 561 (3), 640 (2) milhas náuticas
- 9 detectores de cores
- Construtor de Painel
Taxa UNM sem assistência: $ 79 / hora
Taxa não UNM: $ 119.29 / hr
Instrumentação de citometria: classificadores de células
Saiba mais sobre o CytoFLEX SRT- Lasers 405 (5), 488 (2), 561 (5), 640 (3) nm
- 15 detectores de cores
- Construtor de Painel
Taxa Assistida UNM
Taxa do instrumento: $ 156/hora + Taxa técnica: $ 128/hora
Taxa não UNM
Taxa do instrumento: $ 235.56/hora + Taxa técnica: $ 181.20/hora
Saiba mais sobre o Velocidade- Detectores de cores
- Notas técnicas de aplicação
Taxa para alunos sem auxílio da UNM: US$ 73/ hora
Taxa para não-UNM: US$ 110.23/ hora
Aplicações, capacidades e reconhecimento
Recurso compartilhado de citometria de fluxo UNM
MSC 08-4640 UNM CRF217A
915 Caminho da Saúde
Albuquerque, NM 87131
Telefone 505 925 0064
A citometria de fluxo pode ser usada para as seguintes aplicações e procedimentos:
- Imunofenotipagem
- Análise do Ciclo Celular e da Ploidia Tumoral
- Ensaios de proliferação celular
- Atividade Enzimática
- Caracterização e quantificação de citocinas
- Caracterização de Apoptose e Necrose e Viabilidade Celular
- Metabolismo celular
- Fluxo de cálcio intracelular
- Reações redox
- Conteúdo mitocondrial e potencial de membrana
- Eficiência de Transfecção
Licenças FlowJo estão disponíveis, consulte o custo.
Usuários com licenças de portal ativas devem consultar este guia.
O recurso compartilhado de citometria de fluxo tem os seguintes recursos de classificação de células:
- Classificação de células em massa – máximo de 4 populações diferentes simultaneamente
- Classificação de célula única em placas de múltiplos poços
- Requer operação assistida
As aplicações de classificação incluem linhagem celular monoclonal e geração de biblioteca CRISPR, incluindo enriquecimento pós-transfecção e purificação de uma amostra heterogênea para recultivo, transplante ou sequenciamento de subconjuntos de células ou populações purificadas.
É política do Resource que todos os novos usuários passem por sessões de treinamento específicas da máquina. Essas sessões de treinamento normalmente consistem em duas sessões diferentes com o gerente principal do fluxo e um único usuário. Cada sessão deve durar entre 1 e 2 horas.
As sessões de treinamento são agendadas através do iLabs . Veja as informações sobre o iLabs nesta página.
O usuário é responsável por fornecer o seguinte para sua sessão de treinamento.
Células preparadas a 1x10⁶ / ml em tubos FACS/Eppendorph – O treinamento em Cytek Aurora requer tubos FACS.
- Suas células devem ser filtradas por meio de um filtro de 50 μm antes de executá-las nos citômetros
- O volume celular deve estar entre 500 e 1000 μL
As células a seguir são necessárias para o treinamento
- Controle imaculado
- Controles de compensação – como controles de cor única para cada fluorocromo. As esferas de compensação são preferíveis para marcadores fracos/raros. As células são preferíveis para marcadores altamente expressos.
- Amostras totalmente coradas
Taxas de treinamento de instrumentos:
- Taxa UNM sem assistência: $ 192 / hora
- Taxa não UNM: $ 285.39 / hr
Para reconhecer o uso deste recurso compartilhado, inclua o seguinte em suas publicações:
Esta pesquisa foi parcialmente financiada pelo UNM Comprehensive Cancer Center Support Grant NCI P30CA118100 e o recurso compartilhado de Citometria de fluxo.
Serviço Agilent iLab
Os Recursos Compartilhados da UNMCCC utilizam o Agilent iLab para faturamento, cobrança e reserva de equipamentos.
Usuários atuais podem acessar o iLab em: unm.ilab.agilent.com . Para configuração da conta iLab ou problemas de acesso, entre em contato com Palakshi Reddy Bandapalli ou pelo telefone 505-272-4539.
Para dúvidas sobre serviços específicos ou treinamento em equipamentos, entre em contato com o Diretor Técnico do Recurso Compartilhado correspondente.
Outro Equipamento Básico
Saiba mais sobre o BioTek Neo2- Leitor de placa multimodo híbrido
- Filtro independente e óptica baseada em monocromador
- Medições de absorção, fluorescência, luminescência, polarização de fluorescência
Taxa UNM sem assistência: $ 89 / hora
Taxa não UNM: $ 134.39 / hr
Saiba mais sobre o MAGPIX- Painel multi-analito baseado em esferas magnéticas para quantificação de biomarcadores
Taxa UNM sem assistência: $ 97 / hora
Taxa não UNM: $ 146.47 / hr
Políticas e procedimentos
É sua responsabilidade ler e entender essas informações.
O Recurso Compartilhado de Citometria de Fluxo UNM fornece citometria de fluxo analítica e serviços de triagem de células localizados no CRF 217. Para permitir uma operação suave e acesso justo ao equipamento para todos os investigadores e para manter o equipamento em bom estado de funcionamento, as políticas e procedimentos operacionais devem ser seguidos.
As principais políticas operacionais são descritas abaixo.
Os compromissos para todos os horários de uso do instrumento devem ser agendados no iLabs.
A assistência do operador é necessária para a classificação das células.
As marcações de triagem de células requerem um aviso prévio mínimo de 24 horas. A cobrança da triagem de células começa no início do seu agendamento; o faturamento termina quando a classificação termina. Se sua classificação terminar mais cedo, você não será cobrado por esse período.
Usuários aprovados e treinados podem marcar compromissos para operação automática no mesmo dia.
As consultas noturnas e nos finais de semana são autorizadas apenas para uso autônomo treinado.
Embora as calibrações e outros procedimentos de manutenção sejam de responsabilidade do Flow Core, é importante que os usuários executem adequadamente os procedimentos de inicialização, desligamento e limpeza, conforme descrito nas sessões de treinamento.
A descontaminação e limpeza adequadas da tubulação de fluidos e da célula de fluxo devem ocorrer após cada uso do citômetro.
Os procedimentos de lavagem e limpeza pós-aquisição são considerados tempo de execução normal e serão cobrados como parte do tempo total da consulta.
Todos os usuários devem estar atualizados com o treinamento de segurança de laboratório BSL1 e BSL2 (incluído no Treinamento de Segurança de Pesquisa que é obrigatório para todos os pesquisadores no campus).
Amostras BSL3 e radioativas não são permitidas em nossas instalações sob nenhuma circunstância.
Novos usuários de citometria de fluxo devem ser treinados pela equipe principal antes de acessar a instrumentação.
Espera-se que os auto-operadores sejam capazes de operações normais sem a ajuda do operador da instalação, incluindo inicialização e desligamento, análise, esterilização e manutenção (entupimento dos bicos, etc.).
Observação: se uma corrida autogerida e sem assistência exigir mais de 20 minutos de assistência da equipe, uma taxa de "tempo técnico" será adicionada para converter a reserva em uma sessão parcial ou totalmente assistida: uso sem assistência + tempo/hora de técnico.
Se sua corrida estiver demorando mais do que o esperado e chegar ao tempo de outro usuário, ele tem o direito de esbarrar em você no momento em que a corrida começar.
Último usuário do dia - É responsabilidade do último usuário do dia desligar o instrumento analítico. Caso a última pessoa do dia não consiga cumprir o horário programado, deverá avisar antes de desligar a máquina. Se não houver outra pessoa, a última pessoa reservada precisa vir ao núcleo do fluxo e desligar a máquina.
As reservas podem ser feitas no dia de uso - e devem ser feitas no iLabs. Preencher o tempo exato de uso nos cadernos de cada instrumento garante que as cobranças serão pelo tempo usado na máquina
O treinamento de usuário único está disponível apenas com hora marcada e será realizado usando amostras fornecidas pelo investigador.
O pessoal do núcleo do fluxo determinará quando o investigador será capaz de operar por conta própria.
Os usuários das instalações são responsáveis por todo o arquivamento de dados.
O recurso de recursos compartilhados não tem capacidade para servir como um repositório de dados
Os usuários devem relatar imediatamente quaisquer problemas nas instalações a Josh Monts, através do endereço jmonts@salud.unm.edu.
Notificaremos os usuários quando um instrumento estiver inativo. Se o instrumento no qual você fez sua reserva não estiver funcionando, faremos o possível para auxiliá-lo na coleta de seus dados em um instrumento diferente e dispensaremos a sobretaxa de assistência.
O Diretor Dr. Curt Hines é o árbitro final para os problemas que surgem nas instalações.