Microscopia de fluorescência e imagem celular
A microscopia está no cerne da compreensão da arquitetura do tecido, da estrutura e dinâmica das células, bem como da função molecular. A microscopia de fluorescência é usada rotineiramente para determinar informações espaciais e topológicas sobre células e tecidos. A instrumentação microscópica de varredura a laser sofisticada, câmeras digitais ultrassensíveis e sondas de fluorescência especializadas tornam possível visualizar eventos celulares em tempo real até o nível molecular.
O recurso compartilhado de microscopia de fluorescência e imagem celular avança a excelência na pesquisa do câncer, disponibilizando instrumentação e software de última geração para imagens de fluorescência quantitativas, multi-escala e multimodais.
Promovendo a Excelência em Pesquisa do Câncer
O recurso compartilhado de microscopia de fluorescência e imagem celular auxilia pesquisadores básicos e médicos a obter amostras de imagens e publicar artigos de alto perfil que:
- Elucidar os mecanismos celulares e moleculares do câncer, doenças imunológicas, infecciosas, metabólicas, neurológicas e vasculares
- Avalie a eficácia terapêutica em células e amostras de pacientes
- Testar novas nanotecnologias em ensaios baseados em células
- Medir quantitativamente as mudanças na morfologia e patologia do tecido
O recurso compartilhado de microscopia de fluorescência e imagem celular fornece aos pesquisadores da UNM acesso a instrumentação de última geração para fluorescência múltipla e técnicas de microscopia de luz transmitida:
- Microscópios de fóton único e multi-fóton de varredura a laser e sistemas de imagem hiperespectral permitem a visualização e quantificação simultâneas de manchas histoquímicas e marcadores fluorescentes
- Aplicações de fluorescência de reflexão interna total (TIRF), rastreamento de partícula única (SPT) e microscopia de localização de molécula única (SMLM) para quantificar eventos dinâmicos de células vivas e obter resolução abaixo do limite de difração de luz
- A imagem raciométrica permite a quantificação de mudanças em tempo real no cálcio e outras concentrações de íons em resposta à sinalização celular
O Recurso Compartilhado de Microscopia de Fluorescência e Imagem Celular tem uma equipe de recursos que oferece investigadores:
- Consulta de especialistas sobre design de experimentos e preparação de amostras
- Training
- Imagens pagas
- Assistência contínua
Diane Lidke, PhD; Diretor do Corpo Docente
Departamento de Patologia
2325 Caminho de Saúde, CRF203A
Centro Integrado do Câncer da UNM
Albuquerque, Novo México 87131
Telefone: (505) 272-8375
Michael Paffett, PhD; Diretor técnico
2325 Caminho de Saúde, CRF201A
Centro Integrado do Câncer da UNM
Albuquerque, Novo México 87131
Telefone: 505-272-1437
Keith Lidke, PhD; Conselheiro Especial
210 Yale Blvd NE, 2218
Construção de Ciência Interdisciplinar de Física e Astronomia
Albuquerque, Novo México 87106
Telefone: (505) 277-2616
Para reconhecer o uso deste recurso compartilhado, inclua o seguinte em suas publicações:
Esta pesquisa foi parcialmente financiada pelo UNM Comprehensive Cancer Center Support Grant NCI P30CA118100 e fez uso dos recursos compartilhados de Microscopia de Fluorescência e Imagem Celular.
Após a publicação, envie-nos uma de suas reimpressões ou imagens de capa para nossos registros.
Instrumentação
Localização: CRF219
Detalhes do Sistema
- Microscópio invertido Olympus IX83 personalizado com estágio de digitalização piezo Asylum 3D XYZ
- Excelitas Turbo LED multiespectral (campo amplo) e lâmpada halógena (campo claro)
- Objetiva de imersão em óleo 10X/0.3NA, 20X/0.7NA e 100X/1.4NA
- Câmera CCD monocromática Olympus XM10
- Cabeçote Asylum MFP Origin AFM com faixa de deslocamento estendida para preparações biológicas
- Software de pesquisa de asilo para controles de AFM
- Software Olympus cellSens para controles de microscopia de luz
- BioHeater para trabalhar com células/tecidos vivos
- Sondas de treinamento fornecidas enquanto durarem as quantidades!
- Pratos compatíveis com AFM: WillCo cobre as câmaras inferiores (Ted Pella cat # 14025-20) e pratos de cultura de poliestireno BD Falcon (#351006)
- Superfícies atomicamente planas (mica ou HOPG) para digitalização de alta resolução podem ser encontradas em Ted Pella.com - por favor, pergunte para obter assistência
Aplicações Possíveis
- Modo de contato alternado (CA), também conhecido como Tapping Mode, para geração de imagens em escala nanométrica em preparações secas ou úmidas
- Modo de contato para medições de força mecânica (Módulo Elástico, Adesão, Indentação e Mapeamento de Força) em preparações secas ou úmidas
Localização: CRF216
Detalhes do microscópio
- Microscópio invertido Leica DMi8 com estágio motorizado XY
- Lâmpada de fluorescência de haleto de metal e lâmpada de transmissão de halogênio
- Objetivas 10X, 20X Óleo, 25X Água, 63X Água DIC e 63X Óleo DIC
- Excitação a laser para PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, rodamina e fluoróforos semelhantes a Cy5
- Laser de luz branca ajustável e pulsado: 470 - 670 nm
- Dois lasers adicionais: diodo de laser de 405 nm e um multiargon (linhas de 458, 477, 488, 514 nm)
- Seis detectores: 2 detectores espectrais híbridos * (HyD); 2 SMD espectrais ** HyDs, 1 PMT espectral padrão e 1 PMT transmitido (externo)
- Galvo Z-estágio
- Scanner de ressonância
- Módulo de Microscopia Vitalícia de Fluorescência Pico Harp 300 (FLIM)
- Software de aquisição LASX
- SymphoTime64 (PicoQuant) Software FLIM
- Software de deconvolução Huygens
- Tokai Hit Stage Top Incubator para Live Cell Imaging
* HyDs são detectores especializados que utilizam fotocátodos GAsP e foto-diodos de avalanche
** Detectores de molécula única (SMD)
Aplicações Possíveis
- Amostras fixas montadas em lâmina padrão com lamínulas # 1.5
- Espécimes de células vivas (LabTekII # 1.5 multi-well ou 35 mm (# 1.5) cover bottom)
- FLIM FRET (fixo ou célula viva)
- Branqueamento do aceitador FRET (corrigido)
- Emissão sensibilizada FRET (célula viva)
- FRAP (célula viva)
- Aquisição 3D (Z-Stacks) e imagem de lapso de tempo
- Desmistura multiespectral
- Digitalizações multidimensionais de grandes áreas
- Super resolução por meio do processamento de restauração de imagem (~ 130 nm)
Localização: CRF226
Detalhes do microscópio
- Microscópio invertido Zeiss AxioObserver com estágio motorizado XY
- Lâmpada fluorescente de haleto de metal e lâmpada de transmissão de halogênio
- Objetivas de imersão 10x, 20x, 40x óleo, 63x óleo e 63x em água
- DIC disponível com objetivas 10x, 20x, 40x e 63x
- Excitação a laser para PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, rodamina e fluoróforos semelhantes a Cy5
- Quatro lasers de estado sólido: 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm
- Detecção de canal e espectral - detectores GaAsP PMT
- Detecção simultânea em 3 canais disponíveis no modo Canal
- Detector de matriz Airyscan para aumento de 1.7X na resolução XY
- Detector de luz transmitida
- Sistema de incubação de células vivas: temperatura, umidade e controle de CO2
- Software Zen Blue Image Acquisition
Aplicações Possíveis
- Amostras fixas montadas em lâmina padrão com lamínulas # 1.5
- Espécimes de células vivas (LabTekII # 1.5 multi-well ou 35 mm (# 1.5) cover bottom)
- Branqueamento do aceitador FRET (corrigido)
- Emissão sensibilizada FRET (célula viva)
- FRAP (célula viva)
- Aquisição 3D (Z-Stacks) e imagem de lapso de tempo
- Desmistura multiespectral
- Digitalizações multidimensionais de grandes áreas
- Super resolução por meio do processamento de restauração de imagem (~ 130 nm)
Localização: CRF226
Detalhes do microscópio
- Microscópio invertido Olympus IX83 personalizado com estágio XY motorizado ASI com inserção piezo Z.
- LED multiespectral Excelitas Turbo (campo amplo) e LED branco Lumencor (campo claro)
- Óleo 20x / 0.8NA, óleo TIRF 60x / 1.5NA, água 60x / 1.2NA e objetivas de óleo 100x / 1.4NA
- DIC com capacidade para óptica 60x e 100x.
- Olympus Real Time Controller para câmera temporalmente precisa e sincronização de excitação
- 4 iluminador de linha laser MITICO TIRF para profundidades de penetração independentes
- 4 linhas de laser individuais para TIRF: 405nm (100mW); 488 nm (100mW); 561nm (100mW) e 640nm (140mW)
- Microscopia de Reconstrução Ótica Estocástica Direta (dSTORM), Microscopia de Localização Fotoativada (PALM) e Imagens de Folhas Óticas Laminares Altamente Inclinadas (HILO) são possíveis
- Câmera Hamamatsu Fusion sCMOS e divisor de imagem Geminini W-View para aquisição simultânea de células vivas em 2 cores.
- Foco automático IR ZDC2 não fotodestrutivo para capacidade de foco único extremamente rápido ou contínuo
- Aquecedor objetivo BiopTechs para aplicações de células vivas de curto prazo
- Software de aquisição de imagem Olympus cellSens Dimension
Aplicações Possíveis
- Amostras fixas com lamínulas # 1.5H
- Espécimes de células vivas (LabTekII # 1.5H multi-poços ou 35 mm (# 1.5H) tampa inferior)
- Aquisição 3D (Z-Stacks) e imagem de lapso de tempo
- Aplicações específicas incluem detecção de molécula única TIRF de células vivas, HILO, 2D dSTORM ou PALM
- Pós-processamento habilitado para GPU fornecido por Huygens Localizer
Localização da câmera: CRF218
Detalhes do microscópio
- Microscópio invertido Olympus IX-71
- Lâmpada de fluorescência de mercúrio e lâmpada de transmissão de halogênio
- Monocromador - faixa de excitação 350nm-670nm
- Lasers: 405nm, 488nm, 520nm e 642nm
- Objetivas TIRF 20x, 60x H2O, 100x Óleo, 150x Óleo
- Filtros de fluorescência para pontos quânticos, DAPI, FITC e fluoróforos semelhantes a Rhod, Fura-2, Indo-1
- Software de aquisição de imagem Andor IQ
- Aquecedor objetivo e dispositivos de patologia sistema de incubação de células vivas com CO2, calor, umidade
- Estágio motorizado XYZ
- Câmera Andor iXon EM-CCD
- Divisor de imagem Opti-split (dual)
Aplicações Possíveis
- Amostra fixa montada em lâminas
- Imagens de células vivas com objetivo mais quente
- Rastreamento de partícula única
- Fluorescência de reflexão interna total (TIRF)
- Imagem de razão métrica (excitação dupla / emissão única ou emissão dupla de excitação única)
- Células vivas em cultura
- Widefield Fluorescence - muitos fluoróforos possíveis com monocromador
- Z-stacks e séries temporais
Localização da câmera: CRF212
Detalhes do microscópio
- Microscópio de fluorescência invertido Zeiss AxioObserver
- Câmera monocromática Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS (100 fps em resolução máxima 2048x2048)
- Lâmpada fluorescente de haleto de metal e lâmpada de transmissão de halogênio
- Objetivas 10x, 20x, 63xDIC Oil e 100x Oil
- Contraste de fase para objetivas 10x e 20x
- Os conjuntos de filtros de fluorescência incluem: DAPI, FITC, Rodamina / TRITC / Cy3, Texas Red & Cy5
- DIC disponível com objetivas 63x
- Aquecedor da objetiva (objetiva de água 63x) o Revólver porta-objetivas motorizado para empilhamento Z
- Estágio XY motorizado para aquisição de imagem em várias posições (imagem de lapso de tempo fixo ou de célula viva)
- Software de aquisição de imagem SlideBook6
Aplicações Possíveis
- Amostra fixa montada em lâminas
- Células vivas em placa de lamínula / aquecimento com aquecedor objetivo
- DIC (não confocal) com objetivas 63x, mescladas com fluorescência ou sozinhas
- Imagens de pilhas Z, montagem e série temporal
Localizado em CRF224 e CRF226
Software
- Imagens de volume científico de deconvolução da Huygens (1)
- Livro de slides (1)
- Investigador Estéreo (1)
- Neurolúcida (1)
- LASX (Leica confocal) (1)
- IQTL (análise de scanner Typhoon) (1)
- Zé (2)
- LSM510 (2)
- Software de imagem espectral Nuance (2)
Opções de análise
- Co-localização
- Deconvolução
- Desmistura espectral
- Análise de intensidade
- Análise morfológica
- Renderização 3D
- Contagem de objetos
- Rastreamento de Partículas
- Preparação para publicação
Localizado em CRF214
O Typhoon FLA 7000 é um scanner a laser rápido e versátil para aplicações de imagem biomolecular, incluindo:
- medições sensíveis e quantitativas de marcadores radioisotópicos
- Western blots quimifluorescentes
- fluorescência única (excitação visível)
- documentação de manchas colorimétricas (por exemplo, azul Coomassie e géis corados com prata)
Localizado em CRF214
Li-Cor Odessey Fc é um scanner quase infravermelho (680nm e 740nm) para aplicações de imagem biomolecular, incluindo:
- medições sensíveis e quantitativas de Western blots quimioluminescentes
- documentação de manchas colorimétricas (por exemplo, azul Coomassie e géis corados com prata)
Os serviços de microscopia incluem
- Consulta de especialistas sobre design de experimentos e preparação de amostras
- Treinamento de usuário
- Imagem assistida por operador e aquisição de dados preliminares para pedidos de subsídio
- Abertura anual para informar os usuários sobre atualizações em novos instrumentos, tecnologias e aplicações
- Curso de microscopia para alunos de pós-graduação e bolsistas em óptica e funcionalidades de instrumentos
- Workshops anuais que oferecem treinamento prático a novos usuários na preparação de amostras
Aquisição FasLGFP Resting_20201113_165
Microscopia de fluorescência de reflexão interna total (TIRF) da expressão da atividade de FasL-GFP basal em células RBL
Serviços e taxas de microscopia
Zeiss AxioObserver - Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS Câmera monocromática: $ 7 / hora
Leica TCS-SP8/FLIM: $ 55 / hora
Zeiss LSM800: $ 51 / hora
Microscópio Olympus IX71 de Rastreamento de Partícula Única/Métrica de Razão (Rm. 218): US$ 25/hora
Microscópio Olympus IX83 TIRF/dSTORM (Rm. 226): US$ 30/hora
Todos os treinamentos de instrumentos, imagens com operador e treinamento de análise: US$ 150/hora
- Confocal (4 horas)
- Campo Amplo Avançado (2-3 horas)
- Microscopia de Força Atômica (4-8 horas)
- Campo Amplo Básico (0.5-1 hora)
- Formação de imagens com operador e análise (dependente do projeto)
Financiamento da facilidade
O Recurso Compartilhado de Microscopia de Fluorescência da University of New Mexico & Cancer Center reconhece o seguinte financiamento para a compra de instrumentação ou suporte de instalação desde sua inauguração em 1999
Financiamento Atual
NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) "Subsídio de Apoio ao Centro de Câncer UNM" 9/25/05-8 / 31/20
NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) “Centro para a Modelagem Espatiotemporal de Redes de Sinalização Celular (STMC)” 08/01 / 08-07 / 31/19
STMC P50GM085273: suporte financeiro para Leica TCS-SP8 e Olympus iX71
Financiamento de Instrumentação Anterior
NCRR 1 S10 RR14668 (PI Wandinger-Ness, A.) "Um Microscópio Confocal Zeiss LSM510 para Pesquisa em Ciências da Saúde" 04/01 / 00-03 / 31/01
NSF MCB9982161 (PI Wandinger-Ness, A.) "Rab7 e Função de Proteína Acessória em Endocitose Tardia" (Compra de câmera digital Hamamatsu para imagens de células vivas) 04/01 / 00-03 / 31/06
NCRR S10 RR016918 (PI Wandinger-Ness, A.) “Zeiss Axiovert 200 for Live Cell Imaging Project” 08/01 / 02-04 / 01/04
NCRR S10 RR19287 (PI Wandinger-Ness, A.) "Detector META e Laser 405 nm" 04/01 / 04-03 / 31/05
NCRR 1S10RR025540 (PI Wandinger-Ness, A., co-I Lee, R.) "A Confocal Stereology Microscope for UNM's Fluorescence Microscopy Core" ARRA 05/01 / 09-03 / 31/10
NSF DGE-0549500 (PI Osinski, M. co-I, Oliver Co-PI) “Nanotecnologia para Biologia Celular e Neurociência” (Compra de acessórios para Olympus IX71) 6/15 / 06-5 / 31/11
Matthews Family Fund (PI Lee, R.) “Nuance Spectral Imaging System, Cri” 01/01 / 09-12 / 31 / -09
NIDDK 3R301 DK050141 (PI Wandinger-Ness, A.) "Mecanismos Patológicos da Doença Renal Policística" Compra do Zeiss Axio Observer para 510 META) Suplemento Administrativo ARRA 09/30 / 09-09 / 29/11
NCRR P20 RR11830 (PI Oliver, J., co-PI Eaton, P.) "Enhancing Multidisciplinary Research in New Mexico" 9/30/96 - 9/29/99
NCI R24 CA88339 (PI Sklar, L.) "Um Recurso Compartilhado para a Pesquisa do Câncer da UNM" 07/01 / 00-06 / 30/05
NCI P20 CA88807 (PI Willman, C.) “Bolsa de Planejamento do Centro de Câncer da Universidade do Novo México” 07/01 / 00-06 / 30/05
Financiamento interno 1999-Presente: $ 437,266
Centro de Ciências da Saúde da Universidade do Novo México
Centro de Câncer da Universidade do Novo México
Departamento de Patologia da Escola de Medicina da Universidade do Novo México